شناسایی، همسانه سازی، تعیین توالی ژن virg و ایجاد سویه بومی تخفیف حدت یافته virgδ با استفاده از سیستم λ red recombinase

Authors
abstract

باکتری شیگلا و سویه های اشرشیا کلی مهاجم روده ای (eiec) جزء خانواده با کتریهای گرم منفی و عامل مسری ترین اسهال باسیلی (شیگلوز) می باشند. ژن virg یکی از  فاکتور های ضروری در آسیب زایی باکتری شیگلا است. پروتئین رمزگذاری شده توسط این ژن، بر روی غشای خارجی (om) شیگلا قرار گرفته و به خانواده پروتئینهای خود منتقل شونده at (autotrnasporter) خارج سلولی در باکتریهای گرم منفی تعلق دارد. یکی از روشهای ساخت واکسنهای شیگلا ایجاد تخفیف حدت در سویه های وحشی از طریق جهش زایی در ژنهای ویژه آسیب زایی باکتری می باشد. هدف از این مطالعه شناسایی، همسانه سازی و تعیین توالی ژن virg و ایجاد سویه زنده تخفیف حدت یافته virgδ با استفاده از سیستم λ red recombinase در سویه شیگلا دیسانتری تیپ1 جدا شده از مبتلایان به شیگلوز بود. در ابتدا با استفاده از آزمایش سرم شناسی و واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr)، گونه و سرووار شیگلای جدا شده از بیمار مورد بررسی و تأیید قرار گرفت. با توجه به اطلاعات موجود در پایگاه داده های ژنومی (ncbi)، آغازگرهای شناسایی ژن virg طراحی و پس از تکثیر این ژن، در حامل pgem-7zf همسانه سازی و توالی یابی با استفاده از آغازگر های عمومی حامل انجام گردید. سویه مذکور توسط پلاسمید کمکی pkd46 (حامل ژنهای لازم برای القای نوترکیبی تحت پروموتور آرابینوز) با روش شوک الکتریکی تراریخت گردید. بعد از طراحی آغازگر های ویژه القای نوترکیبی، واکنش pcr با استفاده از حامل pkd3 (دارای کاست کلرامفنیکل که با توالیهای frt همجوار شده است) اجرا شد. تراریخت سازی کاست آنتی بیوتیکی پس از خالص سازی، در سویه شیگلا بومی حامل pkd46 با استفاده از روش شوک الکتریکی انجام شد. سویه جهش یافته با جایگزینی کاست کلرامفنیکل با ژن virg از طریق وقوع نوترکیبی هومولوگ به دست آمد. سپس کاست آنتی بیوتیکی با به کارگیری پلاسمید کمکی pcp20 (حامل آنزیم flp ریکامبیناز) از طریق جایگاه های frt حذف گردید. صحت فرآیند از طریق بررسی خصوصیات  فنوتیپی (رشد سویه مقاوم به کلرامفنیکل) و ژنوتیپی (واکنش pcr با آغازگر های خارجی و سپس توالی یابی محصول آن) مورد تأیید قرار گرفت. نتایج به دست آمده حاصل از تعیین توالی ژن virg در مقایسه با سویه استاندارد (با شماره دسترسی c‏p000035)، هم خوانی کامل (100 درصد) را  تأیید نمود. اطلاعات حاصل ازآنالیز بیوانفورماتیکی حذف 3220 جفت باز از ژن virg را در سویه جهش یافته نشان داد. استفاده از سیستم λ red recombinase ایجاد جهش را تسهیل و در مقایسه با سایر روشها مانند حاملهای انتحاری، روشی مؤثر و ارزان تر می باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

شناسایی، همسانه سازی، تعیین توالی ژن virG و ایجاد سویه بومی تخفیف حدت یافته virGΔ با استفاده از سیستم λ Red recombinase

باکتری شیگلا و سویه های اشرشیا کلی مهاجم روده ای (EIEC) جزء خانواده با کتریهای گرم منفی و عامل مسری ترین اسهال باسیلی (شیگلوز) می باشند. ژن virG یکی از  فاکتور های ضروری در آسیب زایی باکتری شیگلا است. پروتئین رمزگذاری شده توسط این ژن، بر روی غشای خارجی (OM) شیگلا قرار گرفته و به خانواده پروتئینهای خود منتقل شونده AT (Autotrnasporter) خارج سلولی در باکتریهای گرم منفی تعلق دارد. یکی از روشهای ساخ...

full text

همسانه سازی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی

سابقه و هدف: بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virG نقش کلیدی را در بیماری‌زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می‌کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virG و ساخت سازه جهش یافته pGEM∆virG به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است. روش بررسی: با استفاده از آزمون‌های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بوم...

full text

همسانه سازی ژن virg و ساخت سازه جهش یافته pgem∆virg به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی

سابقه و هدف: بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virg نقش کلیدی را در بیماری زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virg و ساخت سازه جهش یافته pgem∆virg به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است. روش بررسی: با استفاده از آزمون های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بومی...

full text

شناسایی، همسانه سازی وتعیین توالی ژن MT ND2 در مرغ‌های بومی خراسان

میتوکندری مسئول تولید 90 درصد از انرژی مورد نیاز سلول می باشد. مقداری از تفاوت‌ها در عملکرد رشد جوجه‌های گوشتی و بیان فنوتیپی راندمان غذایی ممکن است مربوط به اختلاف در راندمان عملکرد میتوکندری باشد. این پژوهش بمنظور همسانه سازی و تحلیل مرغان بومی خراسان با تاکید بر ژن ND2  به منظور بررسی جهش­های احتمالی است. بدین منظور از نمونه خون مرغ بومی خراسان، DNA ژنومی استخراج گردید و با استفاده از آغازگ...

full text

طراحی و ساخت حامل انتحاری pds۱۳۲::∆virg به منظور حذف ژن virg در شیگلا فلکسنری ۲a برای تولید سویه واکسنی زنده تخفیف حدت یافته شیگلا

زمینه و هدف: سویه های شیگلا باکتری های گرم منفی هستند که واجد توانایی ورود به درون سلول های غیر فاگوسیتیی، از طریق ترشح پروتئین های افکتور (که آنتی ژن های تهاجمی نامیده می شوند (ipas)) می باشند. یکی از مهمترین آنها پروتئینvirg است. واکسن های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا، پاسخ های امیدوار کننده ای را در ایجاد ایمنی حفاظتی در مطالعات بالینی بر روی انسان از خود نشان داده اند. در شرایط حاضر، ساخت سوی...

full text

شناسایی، همسانه سازی وتعیین توالی ژن mt nd۲ در مرغ های بومی خراسان

میتوکندری مسئول تولید 90 درصد از انرژی مورد نیاز سلول می باشد. مقداری از تفاوت ها در عملکرد رشد جوجه های گوشتی و بیان فنوتیپی راندمان غذایی ممکن است مربوط به اختلاف در راندمان عملکرد میتوکندری باشد. این پژوهش بمنظور همسانه سازی و تحلیل مرغان بومی خراسان با تاکید بر ژن nd2  به منظور بررسی جهش­های احتمالی است. بدین منظور از نمونه خون مرغ بومی خراسان، dna ژنومی استخراج گردید و با استفاده از آغازگر...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
پژوهش های سلولی و ملکولی

جلد ۲۶، شماره ۳، صفحات ۲۸۹-۳۰۵

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023